实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)/QRT-PCR,是指在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。
荧光定量PCR不仅实现真正实现了绝对定量,而且具有灵敏度和特异性、高能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点。随着生物芯片技术和荧光探针定量技术的结合,荧光定量PCR在医学检测及其他各个领域中的应用前景十分广阔。
荧光定量PCR所使用的荧光基团可分为两种:荧光探针和荧光染料。 使用SYBR荧光染料法来进行荧光定量PCR时,我们首先在PCR反应体系中加入过量SYBR荧光染料。SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后发射一定量的荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。 Taqman探针则是利用探针与模板的特异性结合的特点,以及探针内荧光报告基团和淬灭基团的分子特性来实现对PCR进行定量检测。这种方法可以实现高灵敏度,严格针对特定碱基序列的定量实验。
操作流程:
我们使用的SYBR荧光染料或Taqman探针,依托 Bio-Rad CFX96 定量PCR系统,为您提供实时荧光定量PCR全套技术服务。
我们的服务流程: 1. 根据客户提供基因序列设计定量引物; 2. 提取样品总RNA,并反转录成cDNA; 3. Real-Time PCR,进行实验结果分析。
服务要求:
1. 新鲜的且足量的材料,或直接提供纯化好的总RNA; 2. 提供已知的基因序列,GenBank登陆号,详细参考文献,样品来源等。 (如果您尚未获取该样品该基因的序列,仅有同源物种基因信息,您可能还需要进行基因钓取实验)
服务内容 | 服务说明 | 周期 |
荧光定量PCR |
1. 新鲜的且足量的材料,或直接提供纯化好的总RNA; 2. 提供已知的基因序列,GenBank登陆号,详细参考文献,样品来源等。 (如果您尚未获取该样品该基因的序列,仅有同源物种基因信息,您可能还需要进行基因钓取实验) 3.客户说明实验的具体要求。 |
1-2周 |
结果提供 | 详细的实验步骤、数据分析结果。 | 3-4周 |
结果提供:
1. 完整的实验过程报告;
2. 数据分析结果(发表级图片形式)。